Biochemie
10.1.1 Vyšetření moči
Orientační chemické vyšetření základních složek moči se provádí diagnostickými testačními proužky, které umožňují efektivní screening při rutinním vyšetření a zároveň monitorování následné léčby. Screeningové vyšetření moči může odhalit počáteční příznaky onemocnění ledvin a močových cest, jater či metabolické nebo hemolytické poruchy. Základní chemické vyšetření moči zahrnuje semikvantitativní (případně kvalitativní nebo kvantitativní) stanovení pH, specifické hmotnosti, leukocytů, dusitanů, glukózy, bílkovin, ketolátek, kyseliny askorbové, urobilinogenu, bilirubinu a krve (erytrocytů resp. volného hemoglobinu nebo myoglobinu). Fyziologicky se všechny tyto analyty v moči vyskytují v minimálních koncentracích, které jsou testačními proužky neprokazatelné, ale při různých patologických stavech se jejich koncentrace zvyšuje na detekovatelné množství a stávají se patologickými součástmi moči.
Testovací proužky jsou vyrobeny z umělé hmoty, která slouží jako nosič pro indikační zóny impregnované reagenčními činidly ke stanovení jednotlivých analytů.
Po namočení proužku do moče dochází k aktivaci činidel imobilizovaných v suchém stavu na reakčních ploškách proužku. Činidla jsou aktivována vodou, která je obsažena v měřeném vzorku, a reagují pak s příslušným analytem. Dochází k barevné kolorimetrické reakci, kterou je možno odečíst v předepsaném čase buď vizuálně, nebo reflexní fotometrií (spíše u vyšetření krve).
Testační proužky se vyrábějí jako monofunkční, polyfunkční nebo proužky pro speciální vyšetření. Monofunkční proužky obsahují jednu indikační zónu pro semikvantitativní stanovení určitého analytu (např. glukoPHAN pro stanovení glukózy), polyfunkční proužky obsahují 2 až 11 semikvantitativních indikačních zón, které umožňují vyšetření několika biochemických parametrů najednou podle typu proužku (např.: heptaPHAN – pH, bílkovina, glukóza, ketony, urobilinogen, bilirubin a krev). Pro screening určitého onemocnění jsou určeny proužky s kombinací dvou a více indikačních zón zaměřených na vyšetření analytů souvisejících s daným onemocněním (např.: diaPHAN pro screening DM – glukóza a ketony nebo tetraPHAN dia – pH, bílkoviny, glukóza a ketony). Pro speciální vyšetření jsou určeny speciální proužky, například OVUTEST (imunoPHAN LH) k semikvantitativnímu stanovení luteinizačního hormonu nebo těhotenské testy od celé řady výrobců, které fungují na principu stanovení přítomnosti lidského choriového gonadotropinu (hCG) v moči.
Vyšetření se zásadně provádí v čerstvé, nekonzervované (nativní) neodstředěné a dobře promíchané moči podle instrukcí výrobce testačního proužku. Obecně však platí tato pravidla:
– ze zásobní tuby vyjmeme pouze potřebný počet proužků, aniž bychom se dotkli reagenčních zón a tubu ihned pečlivě uzavřeme
– proužek všemi reagenčními zónami ponoříme na 1-2 sekundy do vyšetřované moče
– přebytečnou moč hranou proužku otřeme o stěnu nádoby
– proužek cca jednu minutu necháme ležet (nebo držíme) ve vodorovné poloze, aby nedošlo ke smíchání činidel z jednotlivých reakčních zón
– po uplynutí reakční doby (většinou jedna minuta) uvedené v návodu výrobce podle typu proužku vizuálně vyhodnotíme zbarvení reagenčních zón s odpovídající barevnou stupnicí na etiketě obalu – proužek ke stupnici přikládáme ve směru vyznačeném šipkami, aby bylo dodrženo stejné pořadí analytů na stupnici a na proužku!
Proužky je nutné chránit před účinkem vzdušné vlhkosti, přímého slunečního světla a zvýšené teploty, proto se musí skladovat pouze v dobře uzavřených původních obalech na suchém a temném místě.
Dalším analytem, jehož koncentrace v moči může být stanovena pomocí rychlého testu, je albumin. Jedná se o imunochemický test založený na principu imunofiltrace přes membránu napuštěnou monoklonální protilátkou proti albuminu. Vzorek moči se aplikuje na políčko s membránou v testovací kazetě a při průchodu membránou dojde k navázání albuminu na protilátku. Poté se na políčko aplikuje konjugační roztok s částečkami zlata navázanými na další monoklonální protilátku a v případě přítomnosti albuminu v moči dojde k červenému zabarvení membrány. Intenzita zbarvení odpovídá koncentraci albuminu a je změřena fotometricky.